Выделение и первичная идентификация культур энтеробактерий

При наличии паренхиматозных органов или целых трупов (плодов) из ис­ходного материала готовят мазки-отпечатки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Энтеробактерий представляют собой грамотрицательные, прямые палочки длинной 1,0-3,0 мкм и диаметром 0,3-0,6 мкм. Распола­гаются одиночно, реже попарно. Для некоторых характерно наличие кап­сулы или микрокапсулы. Спор не образуют.

При наличии иного материала исследования начинают с посева на пи­тательные среды. Рекомендуемые плотные и жидкие питательные среды для выделения энтеробактерий в зависимости от исследуемого материала и пред­полагаемого возбудителя приведены в таблице 15.

Для посева проб материалов, обычно содержащих разнообразную мик­рофлору (фекалии, околоплодная жидкость и др.), наиболее целесообразно применять высокоселективные среды (висмут-сульфит агар, агар Плоскирева). Для проб, обычно не содержащих или содержащих незначительное количество микроорганизмов (кровь, паренхиматозные органы и др.), — слабоселективные дифференциальные среды (агары Левина, Эндо). Одна­ко, учитывая возможность выделения из фекалий и другого материала в качестве возбудителей не только патогенных, но и условно-патогенных энтеробактерий, которые могут сильно подавляться на высокоселектив­ных средах, оптимальным является одновременное применение тех и дру­гих сред. При исследовании проб, в которых концентрация возбудителя, скорее всего, низка, целесообразно использовать среды накопления. Фека­лии перед посевом на плотные среды суспендируют в стерильном физиоло­гическом растворе в соотношении 1:10. При взятии материала ректальным тампоном его погружают в среду обогащения (накопления). Пробирки с посевами помещают в термостат, а по окончании инкубации (12-18 час) делают высевы на плотные селективные среды.

Цитратную кровь засевают в жидкие среды накопления в соотношении 1:10. Для посева сгустков крови после их асептического «обведения» и отсасывания сыворотки сгусток растирают в пробирке стеклянной палоч­кой и вносят в среду накопления в соотношении 1:10. После посева крови или сгустков крови и инкубации в термостате (12-18 час) ежедневно в течение
3 дней делают высев на плотные среды. При отрицательных ре­зультатах высевы повторяют еще на 6-е и 10-е сутки.

Мочу после центрифугирования или без него засевают в среды накопле­ния двойной концентрации в соотношении 1:1.

Посев другого материала осуществляют общепринятыми в бактериоло­гии методами. Посевы инкубируют при температуре 37° С на плотных питательных средах в течение 18-24 часов (48 часов на висмут-сульфит агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации посевов не должен превышать 18 часов (кроме крови). Посевы для выделения иерсиний ин­кубируют при 25-26° С. Чашки с посевами на эти микроорганизмы про­сматривают через 18-20 часов и повторно на вторые сутки термостатирования.

Характеристика колоний энтеробактерий на плотных селективно-диф­ференциальных средах представлена в таблице 13. Более подробная харак­теристика колоний энтеробактерий определенных родов изложена в соот­ветствующих разделах.

Колонии, полученные на селективно-дифференциальных средах и ха­рактерные для энтеробактерий, отсевают на питательные среды для полу чения чистых культур, которые используют для родовой дифференциации энтеробактерий.