Векторні молекули ДНК

Конструювання та використання векторів для клонування генів у клітинах дріжджів, ссавців і людини. Методи та механізми трансформації клітин рекомбінантними ДНК. Знаходження трансгенних клітин.

Поняття про вектор. Вимоги до векторних молекул. Типи векторів, їх конструювання. Вектор та його ємкість. Полілінкер. Функціональна класифікація векторів: экспресуючі вектори, човникові (бінарні) вектори. Властивості бактеріальних плазмід, що використовуються при конструюванні векторних молекул: здатність до автономної реплікації, контроль кількості копій, консервативність разміру, групи сумісності.

Маркерні гени, які використовують в векторах загального призначення. Підходи до конструювання векторів ( зменшення розміру молекул, введення та видалення сайтів розщеплення рестриктазами, включення селективних маркерних генів).

Плазміди серії pBR як основа конструювання плазмідних векторів.

Плазмідні вектори загального призначення для E.coli та інших бактерій. Плазмідні вектори для прямого добору, для клонування промоторів та термінаторів, клонування кДНК.

Вектори для секвенування ДНК. Фагмідні вектори, їх констрування та використання. Будова фагміди pBluscriptII SK+.

Вектори для прямого клонування продуктів ПЛР.

Вектори на основі хромосоми фага λ. Інсерційні вектори та вектори із заміщенням. Способи упаковки рекомбінантної ДНК у фагові частки. Косміди та фазміди, їх будова та особливості використання. Принципи конструювання і селекції рекомбінантних ДНК на основі космід.

Ретровірусні та аденовірусні вектори, вектори на основі хромосом аденоасоційованих вірусів. Принципи адресної доставки трансгенів. Керування експресією трансгенів у клітинах-мишенях. Переваги і недоліки фагових векторів.

Ефективність трансфекції рекомбінантними ДНК. Системи пакування рекомбінантних ДНК in vitro.

Вектори на основі ниткоподібних фагів (M13,f1,fd). Будова геному і особливості життєвого циклу ниткоподібних фагів. Принципи конструювання та використання векторів на основі ниткоподібних фагів.

Фактори, що впливають на ефективність експресії рекомбінантних генів у

бактеріальних клітинах: транскрипція, трансляція, стабільність рекомбінантних РНК і білків, тільця включення.

Конструювання, будова і використання дріжджових штучних хромосом (YAC). Векторні системи на основі фага Р1 (PAC). Бактерійні штучні хромосоми (BAC). Штучні хромосоми ссавців (MAC) та людини (HAEC).