Властивості нуклеаз та способи їх використання в генній інженерії

Явище модифікації-рестрикції. Системи модифікації-рестикції, їх номенклатура та генетичний контроль. Роль систем рестрикції і модифікації ДНК, що індукуються клітиною-хазяїном. Метилювання ДНК фагів і бактерій.

Ферменти рестрикції і модифікації. Специфічність і механизм дії рестриктаз та метилаз. Антирестриктазні механізми бактеріофагів. Ферментний інструментарій. Ферменти, що використовуються в молекулярно-генетичному дослідженні. Системи модифікації-рестрикції класу І. Ендонуклеази рестрикції класу І та ІІІ. Ендонуклеази рестрикції класу ІІ. Характеристика сайтів впізнавання цих ферментів. Ізошизомери. Розщеплення молекул ДНК за допомогою ендонуклеаз рестрикції класу ІІ. Умови розщеплення.

Основні способи використання ендонуклеаз рестрикції класу ІІ в генетичній інженерії. Принципи фізичного картування геномів. Методи побудови рестрикційних карт. Отримання та аналіз макрофрагментів ДНК. Побудова РFGE-карт хромосом.

Використання ендонуклеаз рестрикції для отримання та аналізу геномних фінгерпринтів, виявлення перебудов геному та точкових мутацій, підрахунку числа копій генів, вивчення білок-нуклеїнових взаємодій та генетичного поліморфізму. Поліморфізм довжини рестрикційних фрагментів та його використання.

Вплив метилування на розщеплення ДНК ендонуклеазами рестрикції. Виявлення сайтів метилування ДНК. ДНК-метилази, їх використання для одержання великих рестрикційних фрагментів ДНК. ДНК-лігази. Механізм лігірування ДНК Т4-ДНК-лігазою.