Б. Открытие каталазы в слюне

Каталаза (КФ 1.11.1.6) осуществляет разрушение пероксида водорода с образованием молекулярного кислорода и воды:

2Н₂О₂ → 2Н₂О + О₂

Ход работы. К 1 мл слюны добавляют 1 мл 1%-ного раствора пероксида водорода. Наблюдают медленное выделение пузырьков кислорода.

В. Пробы на глюкозу в слюне.Качественные реакции на глюкозу в слюне (реакции Феллинга и Ниландера) как правило отрицательны. Но при заболеваниях, сопровождающихся гипергликемией (сахарный диабет, тиреотоксикоз и др.), или после приема пищи, богатой углеводами, пробы на глюкозу могут быть положительны.

Ход работы.На диагностическую полоску наносят каплю слюны и сравнивают с эталонной шкалой. Можно проделать реакцию Феллинга. 1 мл слюны собрать в пробирку, добавить 0,5 мл реактива Феллинга и довести до кипения. При наличии глюкозы в слюне образуется красный осадок оксида меди (I).

Г. Реакция на молочную кислоту.При некоторых заболеваниях полости рта в смешанной слюне может содержаться в повышенном количестве молочная кислота, что является фактором риска развития кариеса.

Принцип метода. При добавлении молочной кислоты к свежеприготовленному раствору фенолята железа аметистового цвета образуется лактат железа желто-зеленого цвета.

Ход определения.К 15 мл раствора фенола добавить несколько капель хлорида железа (III). Перемешать. Получившийся реактив аметистового цвета разбавить водой до слабой окраски. В 3 пробирки налить по 15 капель полученного реактива. В первую пробирку добавить по каплям раствор молочной кислоты. Во вторую - 1 мл свежевзятой слюны, а в третью – слюну с добавлением раствора молочной кислоты. Сравните свои наблюдения. Сделайте выводы.

Оформление работы.Полученные результаты качественного анализа слюны оформить в виде таблицы.

Название работы	Применяемые реактивы, условия реакции	Наблюдаемые явления	Чем обусловлены реакции

Работа 4. Количественное определение активности амилазы слюны по Вольгемуту

Амилаза (диастаза) – фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов и мальтозы. Конечные продукты действия амилазы не дают цветной реакции с йодом. Наиболее богаты амилазой слюнные и поджелудочная железы. Амилаза содержится также и в крови, куда попадает, главным образом, из поджелудочной железы.

Принцип метода.Метод основан на том, что слюну разводят в определенной последовательности, после чего приливают одно и то же количество раствора крахмала и находят наименьшее содержание фермента, которое полностью расщепляет все количество добавленного крахмала. Затем производят перерасчет активности фермента на 1 мл слюны. Амилазная активность слюны выражается количеством 0,1%-ного раствора крахмала в миллилитрах, которое может расщепляться 1 мл слюны при температуре 37˚С в течение 30 минут.

В норме амилазная активность слюны составляет 320-640 ед.

Ход работы.В 10 пронумерованных пробирок наливают из бюретки по 1 мл воды. В 1-ю пробирку добавляют 1мл слюны, разведенной в 10 раз. Содержимое пробирки перемешивают и 1мл раствора переносят из первой пробирки во вторую, перемешивают и из второй – таким же образом в 3-ю и т.д. до 10-й пробирки. Из десятой пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом получается ряд разведенной слюны, в котором в каждой последующей пробирке содержится фермента вдвое меньше, чем в предыдущей.

Во все пробирки добавляют по 1мл воды и по 2 мл 0,1%-ного раствора крахмала, перемешивают и помещают пробирки в водяную баню на 30 минут при температуре 37˚С.

Через 30 минут пробирки вынимают, охлаждают, добавляют по 1-2 капли 1%-ного раствора йода и перемешивают. Жидкость в пробирках может окрашиваться в желтый, красный и фиолетовый цвет. Раствор желтого цвета свидетельствует о полном расщеплении крахмала, фиолетовый – что крахмал в растворе еще сохранился.

Оформление работы.Работу необходимо оформить в виде таблицы.

№№ пробирок
Разведение слюны
Количество мл.0,1%-ного раствора крахмала
Окрашивание йодом
Амилазная активность слюны

Расчет:Для расчета берется количество слюны в последней пробирке желтой окраской. Если это 4-я пробирка, то разведение в ней слюны в 160 раз. Составляется пропорция:

1/160 мл слюны расщепляет 2 мл 0, 1%-ного раствора крахмала

1 мл слюны расщепляет Х мл 0,1%-ного раствора крахмала

Х=2х160=320 мл 0,1%-ного раствора крахмала.

Следовательно, амилазная активность слюны равна 320 условным единицам