ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРОБОВ К АНТИБИОТИКАМ

Многие бактерии и грибки продуцируют вещества - антибиотики, угнетаю­щие жизнедеятельность микробов других видов, в том числе патогенных. Анти­биотики известны против всех возбудителей бактериальных инфекций. Каждый антибиотик имеет свой антимикробный спектр действия. Но чувствительность бактерий к антибиотику может снизиться или даже исчезнуть за счет появления резистентных вариантов у данного вида микробов. Поэтому при возникновении бактериальной инфекции необходимо определить степень чувствительности ее возбудителя к антибиотикам с тем, чтобы подобрать из них наиболее эффек­тивный для целее и лечения и профилактики данной инфекции. Активность анти­биотика измеряется в единицах действия (ЕД).

Для определения чувствительности микробов к антибиотикам чаще при­меняют метод диффузии в агар с использованием дисков, содержащих антибио­тики, и метод серийных разведений в жидкой и плотной питательной среде.

Метод диффузии в агар с применением дисков. Он прост в выполнении и позволяет быстро получить результат, что весьма важно для срочного проведе­ния противоэпизоотических мероприятий.

Пробу ставят в чашках с 2%-ным МПА или агаром Хоттингера, содержащим 120-140 мг% аминного азота, или на специальных плотных средах с оп­тимальным для каждого микроба рН. Среду наливают в чашки по 20 мл следя чтобы слой агара был равномерным и толщиной не менее 4-5 мм. После застывания агара на дно чашек наносят 4-5 точек на равном удалении друг от дру­га, в 2,5 см от центра и в 2 см от края чашки.

Смыв с каждой испытуемой агаровой культуры доводят до концентрации 10-20 единиц мутности по оптическому стандарту. 1 мл, взвеси вносят в отдель­ную чашку и покачиванием распределяют по всей поверхности агара остаток отсасывают пипеткой. Чашки с посевами подсушивают при 37⁰С в течение 20­-25 мин.

С помощью пинцета диски с одним антибиотиком раскладывают по чашкам в намеченные точки и слегка прижимают их к среде. Перед раскладыванием дис­ков с каждым другим антибиотиком конец пинцета протирают спиртом и флам­бируют. Посевы с дисками выдерживают 3 ч при, комнатной температуре. За это время диффузия антибиотиков в агар в основном заканчивается. Наиболь­шие концентрации антибиотиков будут под дисками, а по мере удаления от дисков они уменьшаются. Затем чашки ставят вверх дном в термостат при 37⁰С на 16-18 ч.

Учет результатов. В зависимости от чувствительности микроба вокруг диска образуется большая или меньшая зона задержки роста на фоне сплошного газона культуры. С помощью металлической линейки или полоски миллиметро­вой бумаги измеряют по дну чашки диаметры зон задержки роста, включая размер дисков. Если зона больше 25 мм, микроб высокочувствителен к данно­му антибиотику; при размере зоны 15-25 мм микроб чувствителен; если диа­метр зоны 11-14 мм, микроб малочувствителен, а при меньшем размере зоны илн полном отсутствие задержки роста микроб устойчив к антибиотику. Рост от дельных колоний испытуемого микроба в пределах зоны свидетельствует о наличии в культуре устойчивых к антибиотику особей.

Стандартные бумажные диски имеют диаметр 5 мм и пропитаны антибио­тиками в такой концентрации, которая подавляет рост чувствительных микробов в зоне диаметром 28-32 мм. Хранят диски в плотно закрытых склянках или флаконах в сухом месте при комнатной температуре.

Пригодность новых партий питательных сред и дисков с антибиотиками к постановке пробы проверяют с соответствующими для каждого антибиотика тест микробами.

Необходимо употреблять питательные среды с одинаковым содержанием агар-агара, аминоазота и рН, пользоваться чашками с ровным дном и одина­ковой толщиной агара. При нарушении этих условий диаметр зоны может из­мениться на 6-10 мм. Не следует брать в опыт микробы, дающие скудный или наоборот, обильный и ползучий рост. Срок между посевом культур и наложением дисков не должен превышать 30 мин.

При выявлении устойчивых к антибиотикам культур микробов проводят кон­трольные исследования методом серийных разведений в соответствии с методи­ческими указаниями по определению чувствительности к антибиотикам возбуди­телей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных.