Практическая работа № 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ.

Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей – носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Имеются и цоликлоны Анти-D для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ, а также Анти-D по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В или резус-антигена.

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице.

 

Результат реакции с цоликлоном   Анти-А Анти-В Анти-АВ Исследуемая кровь принадлежит к группе
- - - 0(1)
+ - + А(11)
- + + В(111)
+ + + АВ(1У)

 

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.

Наличие агглютинации с Анти-D цоликлоном свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

 

Для лучшего усвоения навыка чтения результатов определения групповой принадлежности крови желающие студенты могут использовать компьютерную программу «Тренажер по определению групп крови».

 

Тестовые задания к занятию №10 – см. Сборник тестов по нормальной физиологии, Красноярск, 2007» для своего факультета.

 

Вопросы для самоконтроля:

1. Назовите 1-й плазменный фактор свертывания крови.

2. Как проводится проба на индивидуальную совместимость крови у исследуемого?

3. В чем заключается 2-я фаза ферментативного свертывания крови?

4. Что такое антикоагулянты?

5. У матери, имеющей резус-отрицательную кровь, первая беременность привела к резус-конфликту. Почему это могло произойти?

6. Что такое неферментативный фибринолиз?

7. Почему при добавлении лимонно-кислого натрия кровь не свертывается?

8. С какого процесса начинается сосудисто-тромбоцитарный гемостаз?

9. Как проводится проба на биологическую совместимость при переливании крови?

10. В чем заключается сущность свертывания крови?

11. Что происходит в первую фазу ферментативного свертывания крови (перечислите)?

12. Какие условия необходимы для поддержания жидкого состояния крови (перечислите)?

13. Какое состояние организма развивается при переливании несовместимой по группе крови?

14. Сколько (в среднем) длится ретракция кровяного сгустка?

15. На какие группы делятся имеющиеся в организме антикоагулянты?

16. Что происходит в 3-ю фазу ферментативного свертывания крови?

17. Резус-иммунизация. Что это такое?

18. Какое значение для свертывания крови имеет витамин К?

19. В каких случаях наблюдается резус-конфликт?

20. Назовите активный первичный антикоагулянт, продуцируемый базофилами и тучными клетками соединительной ткани.

21. По какому механизму идет образование кровяной протромбиназы и сколько длится этот процесс?

22. Под влиянием каких физических факторов осуществляется полимеризация фибрина?

23. В каких случаях развивается гемотрансфузионный шок?

24. Что такое антисвертывающая система?

25. Отец имеет резус-положительную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между матерью и плодом.

26. Назовите 2-й плазменный фактор свертывания крови.

27. Что происходит с эритроцитом после их агглютинации в результате групповой несовместимости?

28. Сколько групп крови в системе АВ0?

29. Какую кровь можно переливать реципиенту с А(II) Rh(-) кровью?