Инструкция к практическому занятию «Кинетика действия панкреатической липазы»

Принцип работы: скорость действия липазы в отдельных порциях молока определяется по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе жира молока за определнный промежуток времени. Количество жирных кислот определяют титрованием щелочью.

Материальное обеспечение:молоко, вытяжка из поджелудочной железы, 0,5 % раствор фенолфталеина, 0,05н. раствор едкого натра, стаканы, колбы пипетки, пробирки, бюретки, штативы.

Ход работы :В два стакана наливают по 10 мл молока и по 1 мл вытяжки из поджелудочной железы. В один стакан приливают 1 мл воды, а в другой – 1мл желчи. Жидкость в стаканах быстро перемешивают. Из каждого стакана отбирают по 1мл смеси в колбу, добавляют 1-2 капли 0,5 % раствора фенолфталеина и титруют 0,05н.раствором едкого натра до слаборозовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд. Затем оба стакана с оставшейся смесью помещают в термостат при 37 град.С. Через каждые 10 минут из стакана отбирают по 1 мл смеси и титруют 0,05н.раствором едкого натра в присутствии фенолфталеина до слаборозовой окраски. Проводят 5-6 таких определений и на основании полученных данных строят две кривые,отражающие процесс гидролиза жира под действием фермента липазы во времени и в зависимости от наличия или отсутствия желчи.

Результаты заносят в таблицу и представляют графически.

 

Время инкубации в минутах	Количество мл 0,05н. NаОН, пошедшего на титрование
Проба с желчью	Проба без желчи
Всего на пробу	Нейтрализовано жирными кислотами	Всего на пробу	Нейтрализовано жирными кислотами