Работа №2 «Доказательства белковой природы ферментов»
Используя цветные реакции, можно обнаружить присутствие белков в растворах и установить аминокислотный состав. Существует 2 типа цветных реакций:
1. Универсальные на все белки (биуретовая и нингидриновая )
2. Специфические на определенные аминокислоты (например, ксантопротеиновая – на ароматические аминокислоты)
Биуретовая реакция.
Принцип метода: Метод основан на способности пептидных связей белков образовывать с ионами Си+2 в щелочной среде соединение фиолетового цвета, интенсивность которого пропорциональна содержанию белков в растворе.
Материальное обеспечение: пробирки, пипетки, штатив, растворы белков, 3% раствор едкого натра, реактив Бенедикта.
Ход работы:
1. Возьмите 3 прибирки.
В первую налейте 1 мл раствора яичного альбумина.
Во вторую налейте 1 мл раствора пепсина.
В третью налейте 1 мл раствора амилазы.
2. Во все пробирки добавьте по 1 мл 3% рствора NаОН и по 0,2 мл реактива Бенедикта.
3. Перемешайте и наблюдайте окраску.
Появление фиолетовой окраски в пробирках свидетельствует о наличии белка.
Нингидриновая реакция.
Принцип метода: ά – аминокислоты свободные , а также входящие в состав пептидов и белков при кипячении с водным раствором нингидрина дают комплексные соединения синего или сине-фиолетового цвета.
Материальное обеспечение: пробирки, пипетки, штатив, растворы белков, 0,5% раствор нингидрина.
Ход работы:
1. Возьмите 3 прибирки.
В первую налейте 1 мл раствора яичного альбумина.
Во вторую налейте 1 мл раствора пепсина.
В третью налейте 1 мл раствора амилазы.
2. Во все пробирки добавьте по 0,5 мл 0,5% раствора нингидрина.
3. Осторожно прокипятите растворы в течение 1-2 минут и наблюдайте окраску.
Появление розово-фиолетового окрашивания, переходящего со временем в синее, свидетельствует о присутствии ά – аминокислот.