Определение цветового показателя крови.

Цель занятия:

§ освоение методики подсчета эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева; § научиться определять цветовой показатель.

Форменные элементы подсчитывают в цельной или стабилизированной крови животных. Подсчет эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов производят в определенном объеме крови (1мм) при помощи специальных счетных камер, с предварительным разбавлением крови или методов подсчета с помощью фотометрических, электронных и других приборов.

Работа 1. Камера Горяева

Счетная камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеются четыре желобка. Между ими образуются узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от него расположены сетки, нанесенные на стекло. При наложении на боковые площадки покровного стекла над сеткой образуется камера глубиной 0,1 мм (рис. 1).

Рис. 1. Камера Горяева

Рис. 2. Сетка Горяева

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратиков, каждый третий из которых разделен продольными и поперечными линиями на 16 маленьких квадратиков. Сторона маленького квадратика равна 1/20 мм , площадь квадратика 1/400 мм², обьем камеры над ним равен 1/4000 мм³ (рис. 2).

Рассмотреть камеру и сетку Горяева под микроскопом на малом и большом увеличении.

Работа 2. ПОДСЧЕТ ЭРИТРОЦИТОВ В КАМЕРЕ ГОРЯЕВА

Реактивы и оборудование: стабилизированная кровь, 0,9-%-ный р-р натрия хлорида, микроскоп, лабораторные пробирки, дозаторные микропипетки или капилляр от гемометра Сали, глазные пипетки.

Ход работы: в сухую чистую пробирку внести 8 мл 0,9-%-ного р-ра натрия хлорида и капиллярной пипеткой 0,02 мл крови. Предварительно кончик пипетки вытереть, кровь выдуть на дно пробирки, а пипетку промыть верхним слоем жидкости. Содержимое пробирки хорошо перемешать. В результате получили разведение крови 1:400, т.е. кровь разбавили в 400 раз.

Камеру Горяева и покровное стекло вымыть и насухо вытереть. Покровное стекло притереть к камере так, чтобы появились радужные кольца (кольца Ньютона). Это служит показателем того, что стекла прилегают вплотную

Заполнить камеру Горяева каплей разведенной крови, поднеся глазную пипетку к краю покровного стекла. Капля заполняет камеру в результате капиллярных сил. Излишек раствора при этом стекает в желобки.

Если на сетку попал воздух, то камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова.

Заполненную камеру поставить под микроскопии через 1 мин считать эритроциты под малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х10 или х15) с прикрытой диафрагмой или опущенным конденсатором (в затемненном поле зрения).

Подсчет эритроцитов производить в 80 маленьких квадратиках, то есть в 5 больших квадратиках по диагонали или по углам сетки и посередине ее. Считают клетки, находящиеся внутри квадрата, а также на левой и пограничных линиях. Порядок подсчета представлен на рис. 3.

Рис. 3. Порядок подсчета эритроцитов в камере Горяева

Найти среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Для этого полученное число эритроцитов (Э) делим на 80 (в одном большом квадрате находится 16 маленьких: 5х16=80). Объем пространства над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм³. Умножая полученное число на 4000, получаем количество эритроцитов в 1 мм³ разведенной крови; умножая на 200, получаем количество эритроцитов в миллионах в 1 мкл цельной крови.

Итоговая формула для исчисления следующая:

Число эритроцитов в 1 мкл =	Э х 4000 х кратность разведения

где Э – среднее арифметическое число эритроцитов в 5 больших квадратах (80 маленьких).

ВЫВОД (сделайте вывод о количестве эритроцитов в крови)

@ ___________________________________________________________________________________________________________________________

Работа 3. вычесление цветового показателя

Цветовой показатель – это процентное отношение содержания гемоглобина к числу эритроцитов в единице объема крови (1мм³).

ЦП =	3 х Hb (г/л)
три первые цифры от числа эритроцитов

В норме ЦП равен 1 или близок к ней. Такие эритроциты называют нормохромными. При ЦП 0,8 и ниже эритроциты слабо насыщены гемоглобином и называются гипохромными. При ЦП выше 1 эритроциты называются гиперхромными.

@Рассчитайте цветовой показатель, используя значения гемоглобина, полученные на предыдущем занятии.

ВЫВОД (сделайте вывод о содержании гемоглобина в эритроцитах)

@ ___________________________________________________________________________________________________________________________

ПОДСЧЕТ ЛЕЙКОЦИТОВ В КАМЕРЕ ГОРЯЕВА

Реактивы и оборудование: стабилизированная кровь, 3%-ный р-р ледяной уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим (1 мл 1%-ного водного раствора краски на 100 мл уксусной кислоты), микроскоп, лабораторные пробирки, дозаторные микропипетки или капилляр от гемометра Сали, глазные пипетки.

Ход работы: в пробирку внести 0,4 мл 3-5%-ного раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (жидкость Тюрка). Капиллярной пипеткой набрать 0,02 мл крови, конец пипетки тщательно протереть. Перенести кровь в пробирку, пипетку промыть жидкостью Тюрка. Кровь в пробирке тщательно перемешать, закрыть и оставить стоять на 4 мин, периодически перемешивая содержимое.

Приготовить камеру Горяева (так же, как и для подсчета эритроцитов).

Кровь в пробирке снова перемешать стеклянной палочкой, взять каплю крови и нанести на край покровного стекла камеры. Лейкоциты подсчитывать в 100 больших квадратах через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х10 или х15) при затемненном поле.

Подсчитанное в 100 больших квадратах число клеток умножают на 50 (разведение крови 1:20), получают окончательный результат в тысячах в 1 мкл.

ВЫВОД (сделайте вывод о количестве лейкоцитов в крови)

@ ___________________________________________________________________________________________________________________________

Занятие 4. Лейкоцитарная формула. Морфология лейкоцитов.

Цель занятия:

§ освоение методики подсчета лейкоцитарной формулы; § знакомство с морфологией лейкоцитов.