Иммунохроматографический анализ (ИХА)

ИХА (предложен в начале 1980-х гг.) можно отнести к группе реакций с мечеными антителами. В качестве метки используют окрашенный латекс или частицы коллоидного золота.

Типичный тест представляет собой пластиковую пластинку и содержит окно для внесения материала, окно для учета результата и одно или несколько окон для внутреннего контроля/контролей (рис. 15).

В реакции используют:

· первые антитела к искомому антигену, иммобилизованные в виде полосы на хроматографическом носителе в окне для учета результата (выше окна для внесения материала);

· вторые антитела к тому же антигену, адсорбированные на микрочастицах золота или латекса (размещаются в окне для внесения материала).

Внутренний контроль/контроли включают:

· выявляемый антиген, нанесенный после окна для учета результата (положительный контроль, контроль протекания всех этапов основной реакции);

· антивидовые антитела против вторых (меченых) антител, закрепленные в виде полосы на носителе (отрицательный контроль, контроль переноса ингредиентов по носителю, адекватность внесения материала);

· неспецифические первые антитела (того же происхождения) (контроль специфичности связывания вторых антител).

Постановка теста на примере системы для диагностики инфекционного мононуклеоза(рис. 16):

Подготовленный исследуемый материал в небольшом количестве (5-7 капель) вносится в стартовое окно тест-системы. Здесь происходит взаимодействие антигена с антителами, адсорбированными на частицах, и начинается движение образовавшихся комплексов за счет капиллярности носителя. Дойдя до антител, расположенных на носителе в окне учета результата, эти комплексы связываются, при этом частицы латекса или коллоидного золота проявляются в виде линии голубого (латекс) или (коричневого) цвета. Поскольку частицы, нагруженные, антителами берутся в избытке, часть их движется дальше и связывается в окне (окнах) внутреннего контроля реакции. Полоса в этом окне свидетельствует о правильной работе тест-системы.

Забор материала	Внесение материала	Учет результата через 5 минут
Рисунок 16. ИХА система для диагностики инфекционного мононуклеоза

 

В настоящее время разработаны тест-системы для установления овуляции и беременности, выявления стрептококков группы А в мазках из зева, вирусов грипа А и В и РС-вируса в соскобах и смывах из носоглотки, возбудителей туберкулеза в мокроте, хламидий в соскобах из уретры и шейки матки, токсина C.dificile в испражнениях, вируса Эпштейн-Барр в крови, определения маркеров повреждения миокарда (инфаркт миокарда), патологического свертывания крови (тромбоз), нарушения обмена кальция (остеопороз) и др.

ИХА может использоваться как для экспресс-индикации антигенов в пробе, так и для идентификации выделенных культур. Например, ИХА позволяет проводить обнаружение листерий в исследуемом материале непосредственно в среде обогащения, без выделения чистой культуры. Это позволяет сократить время исследования до 48 часов.

Таким образом, ИХА тест-системы обладают несомненными достоинствами:

· высокой специфичностью,

· скоростью получения результата,

· доступны, легко интерпретируются,

· не требуют медицинской или лабораторной квалификации,

· могут применяться пациентами самостоятельно в любых условиях.

Однако по чувствительности ИХА системы уступают другим методам иммуноанализа, что позволяет применять их лишь в качестве ориентировочного теста. Существует также проблема документирования результатов и ряд этических проблем, связанных с самостоятельным применением тестов пациентами.

 

Список литературы

Антитела. Методы. В 2-х кн. Кн. 2: Пер. с англ./Под ред. Д.Кэтти. – М.: Мир, 1991. – 384 с.

Иммуноферментный анализ: Пер. с англ./Под ред. Т. Нго и Г. Ленхоффа.- М.: Мир, 1988. – 446 с.

Манолов А. Твердофазные радиоиммунные методы для количественного экспресс-анализа в микробиологии //ЖМЭИ, 1985, N:4, с.100-107.

Теория и практика иммуноферментного анализа/ А.М. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова – М.: Высш. шк., 1991. – 288 с.

Тертон М., Бангхем Д.Р., Колкотт К.А. и др. Новые методы иммуноанализа: Пер с англ. – М.: Мир, 1991. – 280 с.

Birjis Chinoy, Edgar Yee, Sami L Bahna Skin testing versus radioallergosorbent testing for indoor allergens//Clinical and Molecular Allergy2005, 3:4.

C. Harwanegg, R. Hiller Protein microarrays for the diagnosis of allergic diseases: State-of-the-art and future development// J Lab Med 2005, 29(4): 272–277.

C. L. Morgan, D. J. Newman, C. P. Price Immunosensors: technology and opportunities in laboratory medicine//Clinical Chemistry 1996,42:2.- P.193-209.

Clinical chemistry, 1990,36/8, 1408-1427.

Immunoassay of infectious agents/ P. E. Andreotti, G. V. Ludwig, A. H. Peruski //BioTechniques 2003,35: P. 850-859.

J. P. GoslIng A Decade of Development in Immunoassay Methodology// Clinical Chemistry, 1990, Vol.36, No. 8, P. 1408.

L. J. Kricka Miniaturization of analytical systems//Clinical Chemistry, 1998,44:9, P. 2008–2014.

L. J. Kricka Selected Strategies for Improving Sensitivity and Reliability of Immunoassays//Clinical chemistry, 1994, 40/3, P. 347-357.

Immunochemical staining methods / S.J.Naish, T.Boenisch, A.J.Farmilo, R.H.Stead//DAKO Corporation, Carpinteria, California, 1989. – P.41.

Methods of Biomaterials Testing // http:\\www.manfred.maitz-online.de

Microarrayed recombinant allergens for diagnostics of allergy/Harwanegg C., Laffer S., Hiller R et al. //Clin. Exp. Allergy 2003, 33: 7- 13.

R Spiewak ELISpot: Principles of the technique//www.ELISpot.biz

R. P. EkinsLigand assays: from electrophoresis to miniaturized microarrays//Clinical Chemistry, 1998; 44: 2015-2030.

Radioallergosorbent Test (RAST) Methods for Allergen-Specific Immunoglobulin E (IgE) 510(k)s; Final Guidance for Industry and FDA / U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration;Center for Devices and Radiological Health.- August 22, 2001.

Radioimmunometric Assay for a Monoclonal Antibody-Defined Tumor Marker, CA 19-9/ Villano B. C., Brennan S., Bucher C. et al.// Clinical Chemistry,1983, Vol. 29, No. 3, 1983 549-552.

http://biotech.city.tomsk.net/assay/assay.htm – сайт Томского медицинского университета

 

Оглавление

Введение
1. Методы иммуноанализа с применением радиоактивной метки
1.1. Радиоиммунный анализ (РИА)
1.2. Иммунорадиометрический анализ (ИРМА)
2. Методы иммуноанализа с применением флуоресцентной метки
2.1. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)
2.2. Флуоресцентный иммуноанализ с временным разрешением (ФИА ВР)
2.3. Проточная цитофлуориметрия
3. Методы иммуноанализа с применением ферментной метки
3.1. Иммуноферментный анализ (ИФА)
3.1.1. Гетерогенные методы иммуноферментного анализа
Гетерогенный твердофазный ИФА (ELISA)
Элиспот (ЭС, ELIspot)
Иммуноблот (ИБ, вестернблот)
Иммуногистохимия, иммуноцитохимия (ИГХ)
3.1.2. Гомогенные методы иммуноферментного анализа
4. Люминесцентный иммуноанализ (ЛИА)
4.1. Биолюминесцентный иммуноанализ
4.2. Хемолюминесцентный иммуноанализ
5. Некоторые перспективные технологии иммуноанализа
5.1. Иммуносенсоры (ИС)
5.2. Микроэррей (МЭ)
5.3. Иммунохроматографический анализ (ИХА)
Список литературы

 

 

Учебное издание

 

 

Черношей Дмитрий Александрович, Канашкова Татьяна Александровна