Лабораторная работа. Определение активности каталазы.
Принцип метода:молибденовокислый аммоний с раствором перекиси водорода образует комплексное соединение желтого цвета. Каталаза разрушает перекись водорода по следующей формуле:
2Н 2О2 = 2Н 2О + О 2
Степень снижения интенсивности окраски раствора пропорциональна активности каталазы.
Ход работы: в опытную и контрольную пробирку вносят по 4 мл 0,03% раствора перекиси водорода, в опытную пробирку добавляют 0,2 мл гемолизированной крови ( разведение 1:1000). Ингибируют пробу 20 минут при 370 С. Затем в обе пробирки вносят по 2 мл раствора молибдата аммония, а в контрольную – дополнительно 0,2 мл гемолизата. Перемешивают. Измеряют оптическую плотность опытной и контрольной пробы против воды при синем светофильтре. Определяют активность каталазы по формуле:
( Е к – Е 0) . 5600
А= -------------------, где
В
А –активность каталазы (мкмоль Н 2О 2/ мин на мл крови);
Е к –экстинция контроля; Е 0 – экстинция опыта;
В – время инкубации, мин; 5600 – коэффициент
В норме активность каталазы составляет 135 мкмоль Н 2О 2/ мин на мл
крови (в слюне –12-16 мкмоль). Активность каталазы в крови может снижаться при анемии, опухолевом росте, туберкулезе, некоторых других заболеваниях, а повышаться при острых воспалительных процессах ( в слюне – при воспалительных процессах слизистой ротовой полости).
Аргументировано и кратко ответить на следующее:
1. Может ли осуществиться окисление СН3 - СН2 - СН2 - ОН ®
СН3 - СН2 - СН = О в бескислородной среде? Какие условия для этого необходимы? Написать схему реакции.
2. Может ли и при каком условии в бескислородной среде произойти окисление по типу СН3 - СН2 - СН = О ® СН3 - СН2 – СООН? Укажите необходимые компоненты, составьте схему реакции. Как пояснить появление двух атомов кислорода в продукте реакции.
3. Является ли кислород исключительным (единственным) конечным акцептором водорода в цепи тканевого дыхания и вообще в биологическом окислении?
4. Почему окисление в живой природе отождествляли с горением вне организма? Назовите внешние признаки сходства между горением и процессом окисления в организме. Назовите отличия между этими процессами.
5. Напишите реакции дегидрирования соединений:
R-СН2 –СН2 - R; R-СН=О; R- СНОН -R; R-СН=СН-R
6. Установите соответствие:
Редокс-потенциал: А.+0,82; Б. +0,10; В.+ 0,25; Г.- 0,22
Компонент ЦПЭ: 1.Убихинон; 2.Кислород; 3.ФМН; 4.Цитохром
7. Какие из перечисленных соединений являются субстратами ФАД-зависимой дегидрогеназы : глюкоза, сахароза; янтарная кислота; глицериновый альдегид, НАДН +.
8. Напишите схему переноса электронов и протонов от изоцитрата на кислород (изоцитратдегидрогеназа – НАД-зависимый фермент) и укажите
название всех ферментных комплексов.
9. Лекарственные препараты – производные барбитуровой кислоты:
А. Оказывают снотворное действие.
Б. Активируют тканевое дыхание.
В. Ингибируют НАДН-дегидрогнназу.
Д. Вызывают гипоэнергетическое состояние.