Второй этап выделения чистой культуры

1. Просматривают чашки Петри с посевом и изучают изолированные колонии, обращают внимание на их форму, величину, консистенцию и другие признаки.

2. Для определения морфологии клеток и их тинкториальных свойств из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микроскопируют.

3. Для выделения и накопления чистой культуры одну изолированную колонию или несколько различных колоний пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой.

4. Производят вскрытие зараженных лабораторных животных. Исследуют мазки-отпечатки различных органов. Производят посев крови животных на питательные среды.

 

Задания к лабораторному занятию

1. Изучите характер роста Е.сoli на жидкой питательной среде (мясо-пептонном бульоне)

Отметьте:

А) диффузное помутнение среды

Б) осадочный рост

В) образование пленки

Г) пристеночный рост

2. Характеристика выросших колоний визуальным методом и с помощью микроскопа.

Чашку поверните дном к себе и рассмотрите колонии в проходщем свете. Найдите три разных типа колоний, пронумеруйте их и опишите. Обратите внимани на следующие свойства:

А) величину колоний

Б) цвет колоний (наличие пигмента)

В) форму колоний

Г) поверхность

Д) характер кра колонии

Е) консистенцию

Таблица

 

Номер Колония Морфология окраски по Граму
Величина Форма Цвет Поверхность Край Прозрачность
1.              
2.              
3.              

 

3. Приготовление мазков из разных колоний, окрашивание по Граму, микроскопия.

Обратите внимание на размер, форму бактерий и их окраску.

Сделайте зарисовки в альбом.

4. Пересев изученной колонии на скошенный агар для накопления чистой культуры.

При пересеве колонии на скошенный агар нужно бактериологической петлей брать культуру только из отмеченной, изученной ранее колонии, не задевая ближайших.

Засенную пробирку подпишите и поставьте в термостат на 18-24 ч.

Оформите протокол.


Тема: Ферменты бактерий. Методы изучения ферментативной активности бак­терий и их использование для идентификации бактерий.

Цель: Охарактеризовать ферментативную.

 

Вопросы для самоподготовки

1. Классификация ферментов.

2. Конститутивные и адаптивные ферменты. Ферменты патогенности.

3. Биологическая роль ферментов в микробных клетках.

4. Идентификация бактерий по ферментативным признакам.

5. Применение ферментов в биотехнологии и медицине.

6. Выделение чистых культур аэробных бактерий (3 этап).

 

Литература

5. Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробио­ло­гия. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 56-57.

6. Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руково­дство к лабораторным занятиям по микробиологии.рапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 56-57.

6. Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руково­дство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 40-42, 48-50.

В жизнедеятельности микробов ферменты играют большую роль. Они являются обязательными участниками разнообразных биохимических реакций, лежащих в основе функций дыхания, питания, размножения.

Микроорганизмы обладают большим разнообразием ферментов. Они или просто связаны с клеточными структурами бактерий, или растворимы и легко извлекаются из клетки. Основной составной частью ферментов является белок.

Являясь биологическими катализаторами, ферменты обеспечивают течение в бактериальных клетках биохимических реакции, без которых невозможно их развитие. Кроме того, выделяясь во внешнюю среду, ферменты разлагают сложные органические вещества на более простые компоненты, удобные для усвоения бактериальной клеткой.

Выделяемые бактериями во внешнюю среду ферменты обусловливают биохимическую активность бактерий, причем качественная сторона биохимической активности бактерий всегда строго специфична для данного вида бактерий.

Биохимическая активность микробов установилась под влиянием внешних условий в процессе их эволюционного развития. В связи с этим большей биохимической активностью обладают сапрофитные бактерии, приспособившиеся жить за счет мертвых органических субстратов внешней среды, для расщепления которых необходимы все группы ферментов.

Патогенные бактерии обладают меньшей биохимической активностью, имея в своем составе лишь строго определенные ферменты.

Каждый вид микроорганизмов продуцирует постоянный для него набор ферментов, одни из которых расщепляют в разной степени белки и углеводы, а другие вызывают окисление и восстановление различных субстратов.

Относительная стабильность ферментных систем бактерий позволяет использовать биохимические свойства бактерий в сочетании с их морфологическими, культуральными и другими постоянньми признаками для определения видов и типов бактерий, выделяемых из организма больного при инфекционных заболеваниях.

В микробиологической практике для обнаружения ферментов исследуемую культуру микробов засевают на специальные диагностические среды (см. стр. ).

В условиях практической микробиологической лаборатории наиболее часто производят изучение сахаролитических и протеолитических ферментов.