Видоизменение окраски Грама по А. И. Синеву

Заготовляют полоски фильтровальной бумаги, пропитанной 1% спиртовым рас­твором кристаллического фиолетового и высушенной.

Техника.

1. На фиксированный мазок наносят полоску фильтровальной бумаги, приготовленной по методу Синева, и несколько капель воды на 1-2 минуты.

2. Затем снимают пинцетом бумагу. Не промывая препарат водой, сливают краску и наносят раствор Люголя на минуту до полного почернения.

3. Сливают раствор Люголя, не промывая водой, погружают препарат в стаканчик с 96° спиртом на 20-30 секунд до отхож­дения фиолетовых струй краски.

4. Препарат тщательно промывают водой для удаления спирта.

5. Докрашивают фуксином Пфейффера в течение 3 минут. Краску смывают водой, препарат высушивают и микроскопируют.

Микроскопическая картина. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розово-красный (рис.14).

 

Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробов

В связи с высоким содержанием липидов эта группа бактерий плохо прокрашивается обычными растворами анилиновых красителей, поэтому для их окраски используют либо концентрированные красители при условии прогревания мазка, либо флуорохромы. В последнем случае для изучения препарата используют люминесцентную микроскопию.

Окраска по Цилю-Нильсену

Наиболее употребительный метод окраски микобактерий ту­беркулеза. Для увеличения степени проницаемости бактериальной клетки препарат окрашивают фуксином Циля при подогревании. Окрашенные кислотоустойчивые микроорганизмы затем не обес­цвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и спир­тами.

Техника.

1. Фиксированный мазок покрывают фильтроваль­ной бумагой и наливают фуксин Циля. Затем, удер­живая препарат пинцетом, подогревают его в пламени горелки до отхождения паров. Повторяют манипуляцию 2-3 раза, добав­ляя по мере необходимости краску. После охлаждения снимают бумагу и промывают водой.

2. Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, затем тщательно промывают водой.

3. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового си­него в течение 3-5 минут, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Мазок, окра­шенный по Цилю-Нильсену, вместо докраски метиленовым синим можно протравливать насыщенным раствором пикриновой кислоты (по Шпенглеру).

Микроскопическая картина. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в розово-красный цвет, другие формы приобре­тают синюю окраску (рис.15).