Сложные или дифференциальные методы окраски микробов

Дифференциально-диагностический метод окраски по Граму

Наиболее употребительной среди дифференциальных методов является окраска по Граму. При этом методе выявляется спо­собность бактерий удерживать краситель (грамположительные бактерии) или обесцвечиваться в спирте (грамотрицательные бактерии), что связано с различиями в химическом составе и структуре их клеточных стенок.

Для выполнения окраски по Граму надо приготовить следующие растворы.

Карболовый раствор генцианового фиолетового или кристал­лического фиолетового: 1) красителя 1 г, 96% спирта 10 мл, кристаллической карболовой кислоты 2 г, дистиллированной воды 100 мл (растирают в ступке краситель с карболовой ки­слотой до консистенции кашицы, прибавляют небольшими пор­циями спирт и окончательно разводят водой, сливают в бутыль, оставляют на сутки, затем фильтруют) или 2) насыщенного (4,8%) спиртового раствора красителя 10 мл, 2% карболовой воду 100 мл.

Фуксин Пфейффера. См. разведенный фуксин.

Раствор Люголя (в модификации Грама): йодида калия 2 г, дистиллированной воды 10 мл, йода кристаллического 1 г. Смесь хорошо укупоривают, оставляют на сутки, после чего до­бавляют дистиллированной воды 300 мл.

Техника. На фиксированный мазок накладывают кусочек фильтроваль­ной бумаги, и на нее наливают карболовый раствор генцианового фиолетового на 0,5-1 мин. Сливают краситель и, не смывая, на­ливают раствор Люголя на 1 мин. Сливают раствор Люголя и прополаскивают препарат в 95% спирте в течение 0,5-1 мин, пока не перестанет отходить краситель. Промывают водой. До­полнительно окрашивают разведенным фуксином в течение 0,5-1 мин. Краситель сливают, препарат промывают и высушивают.